酶標(biāo)板與多孔細(xì)胞培養(yǎng)板的差別
用多空細(xì)胞培養(yǎng)板測吸光度肯定可以拉,我們經(jīng)常用它來做樣品的蛋白定量和MTT檢測。
區(qū)別:酶標(biāo)板一般要比細(xì)胞培養(yǎng)板貴,細(xì)胞板主要做細(xì)胞培養(yǎng),但也可以用來測蛋白濃度;酶標(biāo)板包括包被板和反應(yīng)板,一般不能用做細(xì)胞培養(yǎng),它主要做免疫酶聯(lián)反應(yīng)后的蛋白檢測,它需要更高的要求還需要特定的酶標(biāo)工作液。如下是個用酶標(biāo)板檢測冠狀病毒IgM/IgG抗體例子:
【操作步驟】
1.加樣品:將標(biāo)本稀釋液100ul(或2滴)加到包被板內(nèi)(預(yù)留陰陽性及空白對照2-5孔),將待檢血清用PBS或生理鹽水按1:20稀釋后取10ul加入反應(yīng)孔內(nèi)。
2.加對照:加入陰性對照1-3孔,陽性對照1孔,各100ul對照血清??瞻讓φ?孔空置。
3.溫育:將反應(yīng)板震蕩使樣品混勻后,置37℃溫箱或水浴反應(yīng)20分鐘。
4.洗板:用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml。
(1)手洗:將反應(yīng)板孔內(nèi)容物傾出,將洗滌液注滿反應(yīng)孔,放置30秒鐘后用力甩去,如此重復(fù)5次后拍干。
(2)機洗:5次,每孔注入洗滌液200ul或注滿,停留30秒鐘后吸盡拍干。
5.加酶標(biāo)工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶標(biāo)工作液,置37℃溫箱反應(yīng)20分鐘后,洗板5次,洗板操作同步驟4。
6.顯色和終止反應(yīng):將底物A、B液各50ul(或1滴)加到反應(yīng)孔內(nèi),37℃避光顯色10分鐘。每孔加入終止液50ul(或1滴)混勻終止反應(yīng)。
【結(jié)果判定】
1.酶標(biāo)儀設(shè)定波長450nm,先用空白調(diào)零,然后測定各孔OD值;如果選用雙波長測定,不必設(shè)置空白對照孔。
2.當(dāng)陰性對照平均OD值小于0.08,陽性對照(pc)OD值大于0.30時,說明試劑盒有效且實驗操作正確,否則應(yīng)當(dāng)重復(fù)試驗。
3.臨界值(CUT—OFF VALUE)=0.15+陰性對照平均(NC)OD值(當(dāng)陰性平均OD值小于0.05時,按0.05計算;當(dāng)陰性平均OD值大于或等于等于0.05時按實際值計算)。
4.標(biāo)本OD值≤臨界值為陰性,標(biāo)本OD值>臨界值為陽性